Tris中文品名為三羥甲基氨基甲烷,CAS77-86-1。是一種白色結晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯、苯,不溶于乙醚、四氯化碳,對銅、鋁有腐蝕作用,有刺激性的化學物質。
蛋白質組學即從蛋白質組的水平進一步認識生命活動的機理和疾病發生的分子機制,而在蛋白質組學的研究中,蛋白質的提取是**基礎也**關鍵的環節之一,Tris是植物蛋白質提取中常用的試劑,方法包括Tris-HCl法、酚法、Tris-丙酮-酚法。本文將對這幾種方法進行分析總結。
1.Tris-HCl法
Tris-HCl法提取的蛋白圖譜效果比用TCA丙酮法提取的效果好。TCA丙酮法所提取蛋白在小分子量區域分布不均勻,蛋白點不清晰,水平條紋與豎直條紋較為嚴重,而Tris-HCl法克服了上述缺點,并分離出TCA丙酮法所不易分離出的酸性蛋白,除分離到較多的中等分子量的蛋白質外,還能得到很多的高分子量和低分子量蛋白質。
Tris-HCl法操作簡便,時間較短成本適中等優勢,提取步驟簡單,蛋白質損失少,實驗結果重復性好。
2.酚法
酚法利用了Tris-飽和酚的特性:酚是蛋白質的良好溶劑,在樣品制備過程中,蛋白質和脂類溶于酚相,鹽、核酸、多酚和多糖等可溶性物質進入水相;通過增加離心力和離心時間,可以盡可能地把密度大的糖離至上清液的上層;酚相中的蛋白質通過乙酸銨的甲醇溶液沉淀,再用冷丙酮多次清洗蛋白,可以去除色素和銨離子等雜質。
該方法在處理含有大量干擾物質的植物樣品中非常有效,但這種方法相對復雜,耗時長。
3.Tris-丙酮-酚法
將TCA丙酮法與酚法結合后用于提取蛋白,融合了TCA丙酮沉淀法和酚法的優點。先用含有乙酸銨的甲醇溶液清洗殘留的TCA并提升溶液的pH到7.0以上,再使用酚和SDS的混合物來溶解蛋白。酚-SDS聯合提取比酚、SDS緩沖液單獨提取更有效。Tris-丙酮-酚法在很多植物的蛋白提取上都取得了非常好的效果,而且電泳圖譜背景和條帶都很清晰,蛋白質點多,可廣泛應用于植物的葉片和果實中蛋白質的提取。
該提取方法非常省時,提取的總時間在1h左右,大大縮短了傳統方法提取蛋白所需的時間。
對于植物蛋白的提取,不僅樣品多樣,而且每種植物所含有的成分也不同,其中的干擾因素也多,所以沒有一種方法可以適用于各種樣品。在實驗中,**先要明確目的,是獲得一種目標蛋白還是獲得所有蛋白,然后再根據樣品特點來選擇提取方法,進行摸索優化。
上述講述TRIS在植物蛋白提取中的應用,除此之外TRIS(三羥甲基氨基甲烷)還有許多用途??捎糜诹酌顾氐?*,亦可作硫化促進劑、化妝品(霜劑、洗劑)、礦物油、石蠟乳化劑。還可用作酸性氣體吸收劑,配制緩沖液、表面活性劑、乳化劑和促進劑。德晟研發銷售TRIS有15年經驗,擁有成熟的研發團隊,對TRIS有較深的研究,可為客戶解決技術問題,有需求的可來電咨詢。
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